綠葉中色素的提取和分離：

1．原理
(1)各種色素能溶解在有機溶劑（無水乙醇等）中形成溶液，使色素從生物組織中脫離出來。
(2)各種色素都能溶解在層析液中，但在層析液中的溶解度不同。溶解度大的色素分子隨層析液在濾紙上擴散得快，反之則慢，因而不同色素可以在濾紙上通過擴散分開，各種色素分子在濾紙上可形成不同的色素帶。
2．實驗過程

觀察結(jié)果：濾紙條上色素帶有四條，由上到下分別是胡蘿卜素、黃色的葉黃素、藍綠色的葉綠素、黃色的葉黃素、藍綠色的葉綠素a、黃綠色的葉綠素b，
如圖



實驗要點及注意事項：

1、實驗中幾種化學(xué)藥品的作用
①加入少量SiO₂，可破壞細胞結(jié)構(gòu)，使研磨更充分，便于色素完全釋放。
②加入少量CaCO₃，，可以中和細胞內(nèi)的有機酸，防止有機酸奪取葉綠素中的鎂離子使葉綠素破壞，從而起到保護色素的作用。但SiO₂.和CaCO₃的加入量要少，否則濾液雜質(zhì)多、混濁、顏色淺，實驗效果差。 2、實驗成功的關(guān)鍵
①葉片要新鮮，顏色要深綠，保證色素的含量。
②研磨要迅速充分。葉綠素不穩(wěn)定，易被破壞，時間過長或研磨不充分都會導(dǎo)致色素的量太少而使實驗失敗。
③濾液細線不僅要求細、直、均勻，而且要求含有較多的色素（可以重復(fù)畫二至三次）。
④濾液細線不能觸及層析液，否則色素溶解到層析液中，將得不到清晰的色素帶。
3、注意事項
①制備濾紙條時，要剪去兩角，這樣可以減小邊緣效應(yīng)，使色素在濾紙上擴散均勻，便于觀察實驗結(jié)果。 ②收集濾液后，要及時用棉塞將試管口塞緊，防止濾液揮發(fā)。

4、濾紙條上的濾液細線，不能觸及層析液的原因：濾紙條上的濾液細線如觸及層析液，濾紙上的葉綠體色素就會溶解在層析液中，實驗就會失敗。
5、提取和分離葉綠體色素的關(guān)鍵：
（1）提取葉綠體色素的關(guān)鍵是：①葉片要新鮮、濃綠；②研磨要迅速、充分；③濾液收集后，要及時用棉塞將試管口塞緊，以免濾液揮發(fā)。
（2）分離葉綠體色素的關(guān)鍵是：①是濾液細線要細且直，而且要重復(fù)劃幾次；②是層析液不能沒及濾液線。
6、收集到的色素濾液綠色過淺，可能原因如下：
①未加二氧化硅，研磨不充分。
②使用放置數(shù)天的菠菜葉，濾液中色素（葉綠素）太少，綠色過淺。
③一次加入大量的95%的乙醇，提取濃度太低（正確做法：分次加入少量95%的乙醇提取色素）。
④未加碳酸鈣或加入過少導(dǎo)致色素分子被破壞。
7、如果濾紙條色素帶重疊，原因可能是濾紙條上的濾液細線接觸到層析液。

知識拓展：

實驗創(chuàng)新：本實驗中的長條濾紙可以改為圓形濾紙，在濾紙的中央滴一滴濾液，然后用一根浸有層析液的棉線的一端垂直接觸濾液的中必位置，會得到近似同心的四個色素環(huán)，由內(nèi)到外依次是黃綠色、藍綠色、黃色、橙黃色。
例 以“葉綠體中色素的提取和分離”實驗中，下列描述正確的是( )
A．將5g新鮮完整的菠菜葉，放入研缽中，加入無水乙醇、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨
B．用毛細吸管吸取少量濾液；沿鉛筆線處小心均勻地畫出一條濾液細線，并連續(xù)迅速地重復(fù)畫2～3次
C．把畫好細線的濾紙條插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙條上的擴散
D．色素分子是有機物，不溶于水，所以研磨過程中加入無水乙醇是為了溶解色素
答案D

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